浅谈 如何解决液相色谱仪色谱柱柱压不正常
浅谈 如何解决液相色谱仪色谱柱柱压不正常-色谱仪_气相色谱仪_液相色谱仪-滕州市惠谱分析仪器有限公司
一 、填料破碎和使用后有填料粉末生成填料破碎一般在装柱过程中发生，装柱压力过大或所选硅胶机械强度过低所至，设定柱压出厂标准可解决。而流动相中高pH值缓冲盐使硅胶溶解并重新形成填料粉末，则会堵塞出口端筛板。这种情况下反冲不起作用，只有换后筛板，不过打开承压的后筛板，对柱床会有不好影响。
二、颗粒物堵塞引起柱压上升和对策
可能堵塞入口端筛板（前筛板）和柱头填料间隙的颗粒物来源有：
●样品（制样时灰尘和滤纸等带入）；
●进样阀密封圈磨损；
●流动相（溶剂本身含有和配制过程进入）；
●液相仪器中泵阀密封圈的磨损；
●缓冲盐析出（一般在梯度运行和进样时盐的溶剂环境改变导致）；
●水和缓冲盐流动相内生长的杂质，也是颗粒物来源的一种，可堵塞筛板和填料间隙。应减少将这类流动相在室温下久放，可放入冰箱存放。
对此，我们能做的方制措施和解决办法有：
1) 预制措施
1.过滤：样品（标准品）和流动相过滤，既方制了筛板、柱头和毛细管堵塞，又能减少进样阀、活塞杆和截止阀等仪器关键部件的磨损。普通用0.45um孔径滤膜过滤样品和流动相，对使用2um以下填料的高压柱的，可用0.20um滤膜。滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯、尼龙、硝酸纤维和纤维等，须根据和样品溶剂及分析物的适应性慎重选择。
2.使用在线过滤器：在线过滤器内装有可换的滤片，滤片孔径一般有2um和0.5um两种。安装位置有两个可选择：在进样器和色谱柱之间时，对样品和流动相中的颗粒物都有用；在泵和进样器之间，则只对流动相有过滤作用。
3.使用保护柱：保护柱是缩小版的色谱柱，内含带填料的可换的柱芯，安装在进样阀和色谱柱之间，用于色谱柱的化学污染为主，也有过滤颗粒物的作用。
2) 故障解决
1.反冲色谱柱：不连接检测器，直接将堵在前筛板上的颗粒物冲出排到废液瓶中。开始时反冲压力可低于正常使用压力，待颗粒物有冲出后，逐步冲洗压力。有时颗粒物已嵌入到筛板里面，反冲不凑效，早反冲、勤反冲相对好。有的厂商为减少堵塞，使用了较大孔径（2-5um）的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。
2.换筛板：一般不建议这样做，因为换筛板会带走粘在筛板上的部分填料，使柱床的均一性受影响，导致柱效下降。不过如果反冲不能解决问题，也只能不得已而为之，要不然就要把色谱柱报废了。3.如果系统中不接色谱柱，柱压仍然高，说明泵出口到色谱柱之间的其它部位，包括进样器、在线过滤器和保护柱等有堵塞，可逐一排查。为了减少死体积，毛细管都做得尽可能的细，也可能被堵。
三、化学污染物引起柱压上升和对策
来源同样是样品、流动相和系统，不过来源于样品的污染普遍，是对复杂基体样品未经前处理或前处理不够的时候。化学污染物主要有：分子量很大的化合物、盐类、脂质、蜡类、油脂、腐殖酸、蛋白质等其它生物来源的物质。
●像盐类这样的保留能力小的污染物会在死体积处很快从柱中洗脱出去，检测器一般对此类物质响应不大，有时表现为干扰峰、基线波动、负峰。
●保留能力中等的污染物，会被慢慢清理色谱柱，表现为宽峰、基线馒头形波动和基线缓慢漂移。
●对强保留的污染物，一般流动相强度不能将其从柱中洗出，会逐步在柱头累积。
有时，累积在柱头的污染物可作为新固定相对分析物起作用，引起保留时间改变、峰拖尾和峰分叉等。污染物在柱头累积到程度，如果不采取措施，会堵塞填料间隙，引起柱压上升。好的办法是选用适合的溶剂冲洗溶解这些物质，同时又不对填料本身有损害。如聚合物柱中累积的蛋白类污染物可用pH13-14的强碱溶液洗掉，但这种方法不适合硅胶基质色谱柱。
1） 方制措施
1. 制样时采用SPE固相萃取等方法，预先将色谱柱类的污染物质清理掉；
2. 经常对分析柱进行冲洗维护：
●流动相中没有缓冲盐:分析完成后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min
●流动相中含有缓冲盐:分析完成后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向冲洗45min，然后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90容易长菌，使用时间不可过3天）。
3.连接保护柱:
●保护柱是分析柱的延伸，在填料类型和粒径上应于分析柱一样，才能大限度起保护作用，又不影响色谱性能。一个设计和装填良好的保护柱，还可增加分析柱的分离效率。
●如果因某种原因需在保护柱中用不同的填料，也应选择比其所保护的分析柱保留能力弱的固定相，这时的保护柱用于截住强保留物质，类似于SPE小柱。
●当保护柱柱芯保护功能用完时，也不能说不可再清洗后复用，但价格低不值得去花这个时间。